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激肽釋放酶2Elisa試劑盒質(zhì)控質(zhì)檢操作流程

點擊次數(shù):912 更新時間:2022-07-21

   激肽釋放酶裂解激肽原產(chǎn)生激肽,主要有緩激肽、胰激肽及蛋氨酰胰激肽,賴氨酰緩激肽可被尿液及血液中的氨基肽酶降解為緩激肽。因都具有緩激肽的結(jié)構(gòu),故作用相似,其中緩激肽作用最強,胰激肽的活性只有緩激肽的1/2,而蛋氨酰胰激肽的活性則只有其1/3。激肽與激肽受體結(jié)合后參與機體許多組織器官的功能調(diào)節(jié)和病理生理過程。

  激肽釋放酶2Elisa試劑盒質(zhì)控質(zhì)檢操作流程:
 ?。?)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
 ?。?)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
 ?。?)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
  (4)陰性對照孔每孔加入PBS50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。
 ?。?)酶標(biāo)板置37℃箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
 ?。?)洗板,陰性對照孔每孔加入PBS50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。
  (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔工作液100μl。
 ?。?)酶標(biāo)板置37℃箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
 ?。?)洗板,陰性對照孔每孔加入PBS50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl。
 ?。?0)每孔加TMB顯色液100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
  (11)每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應(yīng)。
 ?。?2)分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以由容器上的劃痕或指印等造成的光。
 ?。?3)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定。
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